1.建立一個無菌區。無菌區內所有物品都必須是滅菌的，如稍有懷疑應立即更換。物品有下列情況者，應視為有菌，不能在無菌區內使用：
①在非限制區內的滅菌敷料;
②無菌包破損或潮濕;
③無菌包墜落在地面上;
④滅菌有效時間及效果不能肯定;
⑤懷疑無菌物已被污染。
無菌區的建立應盡量接近使用時間，以減少暴露和污染的機會。
2.無菌手術衣的應用。無菌手術衣的無菌范圍僅限于前身肩平面以下，腰平面以上及袖子。其他部位應視為有菌區。手術人員在穿好手術衣后，前臂不應下垂，應保持在腰平面以上。雙手不應接近面部或交叉及放于腋下，應肘部內收，靠醫學教|育網搜集整理近身體。由于手術衣在腰平面以下視為有菌的，因而不應接觸無菌桌及鋪好的手術臺。
手術人員倚墻而立或靠坐在未經滅菌的地方，均是違反無菌原則的。也不應來回走動或走出手術間以外。如因手術需要移動，應面向無菌區。與另一手術人員換位時，應先退后一步，轉過身，背對背地轉到另一位置上。在經過來穿手術衣人員面前時，應互相讓開，以免碰撞污染。
3.正確使用無菌包或無菌容器。任何無菌包及容器的邊緣均應視為有菌，開包時應將包布的四角翻轉并用手握住，防其滑脫污染內容物。取用無菌物時注意不觸及邊緣。利用包布鋪無菌區時，包布的內面是無菌的，包布的外面和邊緣是有菌的。若取無菌包內某種無菌物，余下無菌物仍須保持無菌時，可按原包包好，但須在4小時內應用此包內的無菌物，否則須重新滅菌。
無菌容器為盛無菌敷料、器械或藥液之用。打開無菌容器時，蓋子應朝上，取出無菌物后即蓋好。以容器浸泡消毒用物時，須寫上浸泡時間，中途投入其他器械，應重新計算消毒時間。

無菌溶液瓶一經打開，液體應一次用完，不應保留。倒液時應沖一下瓶口，沖洗瓶口的藥液應棄去，以保證無菌及防瓶口雜質和玻璃碎屑。

4.無菌桌的無菌范圍。無菌桌僅桌緣平面以上是無菌，桌緣平面以下，不能長時間保持無菌完整，應視為有菌。手術護士、巡回護士都不應接觸無菌桌緣平面以下的桌布，以建立一個安全地帶。
凡墜落于手術臺邊或無菌桌緣平面以下的物品應視為有菌。已墜落下去的皮管、電線、縫線不應再向上提拉或再用。無菌布單被水或血浸濕時，應加蓋或更換新的無菌單。
5.接觸無菌區時，必須經過手臂滅菌、穿無菌衣及戴無菌手套。巡回護士取用無菌物品要用無菌持物鉗夾取，并應與無菌物、無菌區保持一定的距離(約30cm)，避免衣袖、衣服接觸無菌物及跨越無菌區，傾倒溶液時只許瓶口進入無菌區的邊緣。
6.減少空氣污染、保持空氣凈化效果。手術室門窗應關閉，人員進出應走側門，盡量減少醫學教|育網搜集整理在手術間內走動，避免引起陣風。手術進行中應保持肅靜，避免不必要的談話。咳嗽、打噴嚏時應將頭轉離無菌區，避免飛沫污染。為防手術人員滴汗，可于額部加一無茵汗帶。請他人擦汗時，頭應轉向一側，不使紗布纖維落入無菌區。無菌容器打開后，應及時蓋好，減少暴露。
7.預防污染。皮膚雖經消毒，只能達到相對無菌，病人的皮膚和工作人員手臂經過消毒以后只能達到相對滅菌，殘存在毛孔內的細菌對開放的切口有一定的威脅，故應注意預防污染。
在穿無菌手術衣及戴無菌手套時，手不應接觸手術衣和手套的外面。戴好手套的手也不可直接接觸病人皮膚。凡與皮膚接觸的刀片和器械不應再用。手術進行中，如手套被撕破或被縫針、銳利器械刺破，應立即更換。針和器械也不可再用。
在進行皮膚切口前，應用無菌紗布墊遮住切口兩旁，或用無菌聚乙烯薄膜蓋于手術野皮膚上，經薄膜切開皮膚，以保護切口不被污染。在延長切口或進行縫合前應再用酒精消毒。
8.沾染手術的隔離技術。進行胃腸道、呼吸道、宮頸等沾染手術時，在切開空腔前應用紗墊保護周圍組織，并隨時吸除外流的內容物。被污染的器械和其他物品應放在污染盤內，實行隔離。污染的縫針和針持應在等滲鹽水中涮洗。全部沾染步驟完成后，手術人員應用無菌水沖洗或更換手套，以盡量減少細菌的污染。
9.更換手術衣。連臺手術前臺手術結束，手術人員應更換無菌手術衣及消毒手臂戴無菌手套，手術間地面及用物應用消毒液擦拭，并用紫外線照射20分鐘。